Virus for PacBio SMRT RNA-Seq Library Constion Kit

九游娱乐(NineGameSports)同汇
Fri, 18 Oct 2019 13:14:32 +0000
三代转录组产品, 产品, SP0041S, 三代转录组

Pacbio做为三代测序的先驱，SMRT技术为我们提供了科研的更多可能。在三代转录组测序，只有clontech一个品牌为PacBio提供配套的试剂盒。Tiosbio的出现为科研领域增加了选择。Tiosbio根据PacBio的技术特点。进行了大量的优化和改进。使整个操作程序由原来的2天时间缩短到8个小时以内。Tiosbio推出了SUPERSWITCH?
三代转录组建库试剂盒。SUPERSWITCH?第三代测序转录组文库构建试剂盒提供了一种基于PCR方式从纳克级总RNA合成高质量cDNA的方法。SUPERSWITCH?第三代测序转录组文库构建试剂盒cDNA合成技术是基于RNA转录5’末端跳转机制 (Switching Mechanism at 5′ End of RNA Template，SMART) 技术。SMART技术非常适合起始样品量有限的材料，能够以2 ng总RNA（或极低浓度样本）合成的高质量cDNA，用于杂交探针、”Virtual Northern” blots、cDNA测序及其他应用。

1. 本试剂盒的5’和3’采用不同的接头引物，在原始数据上就能直接判读resds的来源是mRNA还是cDNA。

2. 本试剂盒采用SUPERSWITCH?
技术，生成高质量的双链cDNA。满足nanopore的上机要求。

3. 本试剂盒的建库产物，可以直接连接PacBio的环状测序接头。省略了DNA的损伤修复和DNA的末端修复2个主要步骤。使操作时间大大的缩短。

4. 本试剂盒的模板为样本的总RNA,最大限度的反应了样本的转录组的均一性。

5. 本试剂盒根据PacBio的读长特点，增加了纯化步骤，使产物的起始长度为400bp。大大节省了测序资源。

试剂盒组分：

1. 试剂盒1

目的

试剂

PacBio

Nanopore

SP0021

SN0021

M/10次

L/20次

M/10次

L/20次

反

转

录

1

●SUPERSWITCH? 3RRT Oligonucleotide

12μL

24 μL

6μL

12μL

2

●dNTP Mix (10 mM)

40 μL

80 μL

20 μL

40 μL

3

●Deionized H₂O

100 μL

100 μL

100 μL

100 μL

4

●5X First-Strand Buffer (RNase-Free)

60 μL

120 μL

30 μL

60 μL

5

●SUPERSWITCH? SolutionⅠ

10 μL

20 μL

5 μL

10 μL

6

●SUPERSWITCH? SolutionⅡ

10 μL

20 μL

5 μL

10 μL

7

●RNase Inhibitor (40 U/μL)

12 μL

25 μL

6 μL

12 μL

8

●SUPERSWITCH? Reverse Transcriptase (200 U/μL)

12 μL

25 μL

6 μL

12 μL

9

●SUPERSWITCH? 5RRT Oligonucleotide

12 μL

24 μL

6 μL

12 μL

PCR

10

●5AP PCR Primer (12 μM)

100 μL

200 μL

100 μL

200 μL

11

●3AP PCR Primer (12 μM)

100 μL

200 μL

100 μL

200 μL

12

●Marathon DNA Polymerase（1U/μL）

24μL

48μL

24 μL

48 μL

13

●2×PCR Buffer

765μL

1530 μL

765μL

1530 μL

14

●2.5 mM dNTP

160μL

320 μL

200 μL

400 μL

1. 试剂盒2：Tiosbio? 200bp Cleaner

目的

试剂

PacBio

Nanopore

M/30次

L/60次

M/30次

L/60次

PCR

产物

纯化

1

○Buffer P5

7.5 mL

15 mL

15 mL

30 mL

2

○Wash Buffer

3.25 mL

6.5 mL

6.5 mL

13 mL