支原体检测试剂盒（RPA法）

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Thu, 08 Jan 2026 07:50:57 +0000
SNP可视化检测系统, JY2249, RPA法, 支原体

本试剂盒采用重组酶介导等温核酸扩增（Recombinase Aided Amplification，RAA）技术对支原体检测目标序列进行扩增，产物可通过琼脂糖凝胶电泳进行检测。RAA是一种等温核酸扩增技术，在等温条件下（通常为39℃），重组酶和引物形成蛋白/单链核苷酸的复合体 Rec/ssDNA，在辅助蛋白和单链结合蛋白 SSB 的帮助下，侵入双链DNA 模板；在侵入位点形成 D-loop 区域，并开始对 DNA 双链进行扫描；待找到与引物互补的目的区域后，复合体 Rec/ssDNA 解体的同时，聚合酶也结合到引物的 3′ 末端，以样品DNA为模板，30 ~ 40 min即可实现对目的基因片段的高效扩增。正、反向引物建议的设计长度为30 ~ 35 nt之间，长度通常长于PCR引物。引物过短可能会降低反应重组率，响扩增速度和检测灵敏度；引物过长则有可能形成二级结构而影响扩增。引物浓度应根据模板的浓度进行筛选，以确定最佳浓度，提升扩增效率。扩增片段的长度推荐为150 ~ 300 bp，通常不超过 500 bp。注意，模板DNA片段过长或出现重复序列时，扩增的准确性会降低。