1.Tiosbio? GelRed?是新型无毒核酸染料,GelRed?独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内,艾姆斯氏实验表明其诱变性远远小于EB。
2.灵敏度高:适用于各种大小片段的电泳染色,对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。
3.稳定性高:适用于微波或其它加热方法制备的琼脂糖凝胶;室温下的酸、碱缓冲液极其稳定,耐光性强。
4.耐光性强:实验室的日常光线照射6个月仍可保证性能稳定。
5.信噪比好:样品荧光信号强,背景信号低,荧光亮度是EB的10倍以上,肉眼可观测到亮度明显比EB强。
6.操作简单:与EB一样,在预制胶和电泳过程中染料不降解;而电泳后染色过程也只需30分钟且无需脱色或冲洗,即可直接用紫外凝胶透射仪观察。
7.适用范围广:可选择电泳前染色(胶染法)或电泳后染色(泡染法);适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳;可用于dsDNA、ssDNA 或RNA 染色。
8.完美兼容:与EB有相同的光谱特性,无需改变滤光片及观察装置:标准的EB 滤光片或SYBR 滤光片都适用,使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可,在300nm紫外光附近可得到最佳激发。
| 名称 | GelRed? | GelGreen? | Sybr Green I | EB | Goldview |
| 灵敏度 | 高 | 高 | 高 | 低 | 低 |
| 稳定性 | 高 | 高 | 低 | 高 | 高 |
| 对DNA
迁移影响 |
条带不弯曲 | 条带不弯曲
DNA不迁移 |
染料浓度高时,
条带易发生弯曲迁移 |
条带不弯曲
DNA不迁移 |
条带不弯曲
DNA不迁移 |
| 安全性 | 安全无毒。独特的油性大分子量;不易挥发;不易吸入;不能穿透细胞膜进入活体细胞,无诱变性,无致癌性 | 安全无毒。独特的油性大分子量;不易挥发;不易吸入;不能穿透细胞膜进入活体细胞,无诱变性,无致癌性 | 花箐染料,能透过细胞膜进入活体细胞内,但容易生物降解,不会在体内残留,安全无毒。 | 分子量小,易挥发升华,易吸入人体,不易生物降解,在体内长期残留。易引起有机体突变,强诱变剂和高致癌物。 | 主要成分为吖啶橙,高毒,致癌,高诱变性。易挥发升华,易吸入人体,能穿透细胞膜进入活体细胞内,不易生物降解,体内长期残留。 |
| 适用性 | 与EB光谱特性一致,无需改变滤光片及观察装置。普通紫外凝胶透射仪可用,300nm 紫外光附近可得到最佳激发。 | 254nm紫外凝胶透射仪或可见光凝胶透射仪观察。 | >100bp产物电泳染色, 254nm激发的紫外凝胶透射仪或可见光凝胶透射仪观察。 | >100bp产物电泳染色,背景荧光信号高;普通紫外凝胶透射仪观察。 | >100bp产物电泳染色,背景荧光信号高; 254nm 激发的紫外凝胶透射仪或可见光凝胶透射仪观察。 |
500μL/支。
2~8℃避光保存12月。
Q:GelRed?/GelGreen?与核酸的结合机制是什什么?
A:GelRed?/GelGreen?通过静电及电荷相互作用与核酸结合。
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Q:GelRed?/GelGreen?检测下限多少?
A:GelRed?/GelGreen?是超敏感的染料,可检测含量低至0.1ng的DNA。仪器灵敏度和曝光设置均影响检测极限。
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Q:GelRed?/GelGreen?的使用量是多少?
A: 10000×储备液用于1×甚至0.5×预制凝胶使用量1:10000~1:20000(例如: 5μL用于50~100mL 凝胶),或1:3333 比例用于电泳后染色(15μL用于50 mL溶液)。
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Q:GelRed?/ GelGreen?需要在黑暗中使用吗?
A:GelRed?和GelGreen?长期储存需避光,但可在室内光线下使用。
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Q:哪些仪器可用于GelRed?和GelGreen?的检测?
A:标准(302或312nm)紫外透射成像仪可用于检测GelRed?。254 nm的紫外透射仪、可见光激发的凝胶成像仪(如Dark Reader)或488nm凝胶激光扫描仪均可检测GelGreen?。
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Q:GelRed?和GelGreen?适用于什么样的发射滤波片?
A:GelRed?适用于溴化乙锭滤片; GelGreen?适用于SYBR Green或黄色滤片。另外,GelRed?或GelGreen?均适用于长通道黄色滤片。
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Q:marker电泳为何有时分辨率会不高?
A:GelRed?比EB 分子大,在预制胶中对DNA 的迁移有一定影响。建议采用后染法以保证DNA迁移的真实水平。
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Q:如何提高预制凝胶的条带分离效果?
A:①减少DNA上样量。过量的DNA样本容易造成污染和微笑条带。推荐已知浓度样品的上样量为50~200ng/泳道。对于未知浓度的样品,尝试1/2或1/3的常用上样量。
?? ②减少GelRed?在凝胶中的总量,GelRed?再稀释一倍后使用比如用0.5×的浓度来代替1×的浓度。
?? ③降低琼脂糖凝胶的百分比浓度。高分子量DNA在低百分比的琼脂糖凝胶分离效果更好。
?? ④更换电泳缓冲液。含硼酸盐的TBE 缓冲液导电性比TAE缓冲液更好。
?? ⑤为了避免染料可能对DNA迁移的干扰,建议使用电泳后染胶。
?? ⑥电泳时电压不宜过高,一般TBE缓冲也电压不要超过120V,TAE 不要超过 100 V。
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Q:GelRed?/GelGreen?迁移的方向?
A:相对EB,GelRed?和GelGreen?不容易通过凝胶迁移。电泳缓冲液中不需要添加额外的染料,凝胶染色更均匀。
Q: 为何有时会出现污染或微笑的DNA条带或错误的DNA迁移条带?
A: GelRed?和GelGreen?在预制凝胶电泳中会影响DNA 的迁移,尤其国产的某些限制性酶切marker或DNA样本,可能会在GelRed?预制凝胶中发生异常迁移。
Q:GelRed?荧光弱,性能降低,或后染法琼脂糖凝胶中仍有染料是什么原因?
A : 溶解的染料可能沉淀了。将GelRed?45~50℃加热2min,搅拌至染料溶解。另外应室温储存染料,以免沉淀。
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Q:后染法需要去除染料的步骤吗?
A: 不需要,但高背景的凝胶可通过适当脱色降低背景。
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Q: GelRed?和GelGreen?可用于单链DNA或RNA的染色吗?
A:可以,GelRed?对单链核酸染效果比GelGreen?敏感5倍左右。
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Q:GelRed?/ GelGreen?凝胶可以预制、储存吗?
A:完整的GelRed?/GelGreen?预制琼脂糖凝胶可在4℃避光贮存。
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Q:GelRed?/GelGreen?的预制胶可以重复使用吗?
A:不可以,连续电泳会降低染色强度。
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Q: 预制的GelRed?/GelGreen?凝胶可以重新融化再制备吗?
A: 是的,预制胶溶化后最好再添加一些染料,保证重新制备凝胶的信号强度。
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Q:GelRed?/ GelGreen?电泳后染色可重复使用吗?
A:可以。如果敏感度降低,则建议更换新鲜的染料溶液。
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Q:GelRed?及GelGreen?与克隆、连接、测序的下游扩增子兼容吗?
A: 兼容。由于GelRed?/GelGreen?与DNA结合比EB更紧密,需要去除样品DNA中的染料,以确:笮僮。
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Q:GelRed?/GelGreen?安全性如何?
A:GelRed?/GelGreen?经过埃姆斯AMS及相关测试,已经被证明是可替代EB和SYBR,更安全的染料。但使用这些试剂也要遵循实验室安全条例,以免污染DNA等样品。
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Q:GelRed?和GelGreen?用后应该如何处置?
A:GelRed?和GelGreen?通过TUV认证测试,及中国农科院的斑马鱼测试,可以直接倒入下水道。但不同国家和地区的规定可能存在差异,请联系当地的安全监管部门获取相关信息。
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Q:GelRed?可用于脉冲凝胶电泳和凝胶迁移电泳分析吗?
A:可用于EMSA和PFGE凝胶的电泳后染色。
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Q:GelRed?/GelGreen?染色的胶可用于Southern或Northern杂交吗?对转膜或杂交过程有干扰吗?
A: 建议使用后染法。
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Q:GelRed?可以用于检测RNA的甲醛变性胶吗?
A: 可以。
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Q:GelRed?可用聚丙烯酰胺、DGGE、EMSA 实验或PFGE(脉冲。┠郝?
A:可以,需使用后染法。
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Q:GelRed?可用于彗星试验(单细胞凝胶电泳测定技术,一种单链或双链DNA突变和破损的遗传测定法)吗?
A: 可以。
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Q:GelRed?可用于碱性凝胶电泳缓冲液(30mM NaOH,1mM EDTA)吗?可用于氯化铯梯度纯化DNA的染色吗?
A: 可以。正丁醇萃取前,加SDS至终浓度0.1%,可去除纯化的DNA中的GelRed?。
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Q:GelRed?和GelGreen?在DMSO 和水中两种溶剂中的溶解性及效果是否存在差异?
A: 两种溶剂的效果相似。